Занятие 4. Поиск сходных нуклеотидных последовательной, не кодирующих белки

 
     

Ваша задача — выбрать тРНК у кишечной палочки (Escherichia coli K-12) и найти наиболее похожую на нее последовательность в родственном геноме. В качестве "родственного" генома мы предлагаем вам геном достаточно далекого организма – геном сенной палочки (Bacillus subtilis), см. P:/tmp/bs_genome.fasta

Внимание! В отчете нужно привести все использованные команды в их окончательной версии!

  1. Определите, какая тРНК была использована рибосомой при присоединении 4-ого аминокислотного остатка к растущей цепи Вашего белка
  2. Определите, какой аминокислотный остаток находится в 4-ой позиции Вашего белка. Определите соответствующий ему кодон в гене Вашего белка. Запишите кодон в таблицу, при записи используйте 'U' и правило 5'→3'. С помощью таблицы стандартного генетического кода определите возможную вырожденную позицию в данном кодоне. Выделите ее подчеркиванием. Запишите последовательность "идеального" (т.е. полностью комплементарного) антикодона, используя 'U' и правило 5'→3'. Подчеркните вырожденную позицию.

    Определите, сколько разных тРНК использует E.coli для данного аминокислотного остатка, см. подсказки.
    Выберите из них ту тРНК, которая подходит в Вашем случае (проверьте и кодон и антикодон).

    Получите ее последовательность из записи EMBL, см. подсказки.

    Таблица 1. Выбор т-РНК (шаблон отчета)

     Аминокислотный остаток в 4-ой позиции белка XXXX_ECOLI X
      Соответствующий кодон в гене xxx 5'-NNN-3'
      Идеальный антикодон 5'-NNN-3'
      Сколько можно было бы ожидать разных тРНК для остатка X, если опираться на генетический код?  
      Сколько разных тРНК для остатка X аннотировано в геноме кишечной палочки?  
      Характеристика выбранной для дальнейшего изучения тРНК:
          имя гена  
          локализация гена в геноме  
          распознаваемый кодон  
          антикодон  

    Результат поиска всех <например, аланиновых> тРНК у Escherichia coli K-12
    (преформатированный текст из файла с результатом поиска)

  3. Поиск гомологичных тРНК в родственном геноме
  4. Ваша задача — найти в геноме Bacillus subtilis (P:/tmp/bs_genome.fasta) последовательность, наиболее похожую на последовательность тРНК из E.coli, выбранную в упр. 1. Поиск надо провести с помощью 4-х разных программ для быстрого поиска сходных нуклеотидных последовательностей.

    Таблица 2. Поиск гомологичной т-РНК (шаблон отчета)

    Программа FASTA BLASTN MegaBLAST discontiguous MegaBLAST
    Длина якоря        
    Результаты поиска        
    Число находок с E-value < 0,01        
    Характеристика лучшей находки:
          E-value        
          длина выравнивания        
          вес выравнивания        
          координаты в геноме        
    Аннотация лучшей находки по записи EMBL:
          имя гена        
          это тРНК?        
          это тоже <аланиновая> тРНК?        

    В кратком резюме сравните эффективность разных программ.

    См. подсказки.


  5. *Найти ошибки в тексте
  6. В файле P:/y05/Term3/BLASTtext.doc содержится цитата из реальной научной статьи. Студент, обнаруживший в тексте не менее 3-х ошибок, может написать об этом преподавателям. Авторы первых 5 хороших писем смогут получить до 3-х бонусных баллов