Учебный сайт Ксении Худяковой

Главная > Семестры > Семестр 4 > Практикум 5

Занятие 5. База данных KEGG

1. Извлечение информации о ферментативной антивности из БД ENZYME

Для выполнения задания был выбран идентификатор 1.1.1.1. Согласно базе данных ENZYME этому идентификатору соответствует алкогольдегидрогеназа: фермент, окисляющий первичные или вторичные спирты до альдегидов или кетонов. Альтернативное название - альдегидредуктаза, что отражает протекание реакции в обратном направлении. Субстрат в этой реакции спирт, продукт - вещество с карбонильной группой.

2. Работа с KEGG PATHWAY

Для второго задания был выбран гликолиз и глюконеогенез. Карта метаболического пути. Гликолиз - это процесс превращения глюкозы в пируват и выработки небольших количеств ATP и NADH. В цикл вступают молекулы глюкозы, а конечным продуктом является пируват. Глюконеогенез - обратный процесс. Большинство реакций гликолиза обратимы, и в глюконеогенезе они просто идут в другую сторону. Три реакции необратимы, поэтому для обращения их существуют обходные пути, использующие ферменты, которые не участвуют в гликолизе. Эти два процесса связаны с:
метаболизмом крахмала и сахарозы через альфа-D-глюкозо-1-фосфат
пентозофосфатным путём через альфа-D-глюкозо-6-фосфат и глицеральдегид-3-фосфат
фиксацией углерода фотосинтезирующими организмами через 3-фосфоглицерат
цитратным циклом через оксалоацетат и ацетилКоА
метаболизмом пропаноата через L-лактат
Я выбрала три организма:
Homo sapiens (эукариот),
Escherichia coli K-12 MG1655 (прокариот),
Methanothermus fervidus (архея).
Абсолютно все ферменты этих двух процессов есть во всех трех организмах, что показывает возможность всех организмов осуществлять и гликолиз и глюконеогенез.

3. Работа с KEGG REACTION

Я выбрала реакцию, катализируемую фосфофруктокиназой С, ADP-зависимым ферментом. Идентификатор реакции R09084. На рис.1 изображена схема гликолиза с выбранной реакцией (она покрашена красным), а на рис.2 схема этой реакции.

Рисунок 1. Место выбранной реакции в общей схеме гликолиза. Соответствующая реакция выделена красным, подписан идентификатор фермента, который ее осуществляет.

Рисунок 2. Схема выбранной реакции. Глюкозо-6-фосфат (слева) превращается в глюкозо-1,6-бифосфат (справа), при этом происходит перенос фосфатной группы с АДФ (слева под стрелкой). АДФ в результате превращается в АМФ (под стрелкой справа).

4. Работа с KEGG ORTHOLOGY

В гликолизе есть реакция, которую катализирует два ортологичных ряда белков. Их идентификаторы K08074 (48 последовательностей) и K00918 (86 последовательностей).

Рисунок 3. Место выбранной реакции в общей схеме гликолиза. Соответствующая реакция выделена красным, подписан идентификатор фермента, который ее осуществляет.

Далее из полученных последовательностей с помощью программы muscle было построено выравнивание [проект в JalView]. В выравнивании есть множество доменов, общих для обоих ортологических классов белков, поэтому они однозначно гомологичны. Есть один белок (>tr|B4GJ98|B4GJ98_DROPE|K08074/1-92), который плохо выравнивается, поэтому я удалила его из выравнивания. С помощью программы MEGA с использованием алгоритма Neighbour-Joining с числом Bootstrap-реплик 100 было построено дерево, которое доступно здесь. От корня отходят две ветви, соответствующие двум ортологичным классам белков, то есть они четко разделяются эволюционно. Эти две главные ветви имеют высокую бутстрэп поддержку.