Вернуться на страницу семестров

Белок Cip1

Мне достался белок Cip1, ниже я предоставлю информацию о нем, и о процессах с его участием.


История моих запросов в PubMed:
Запрос Запрос как его понял PubMed Всего находок Всего в открытом доступе Всего обзоров
(Cip1[Title]) Сip1 [Title] 1273 589 1170
(Cip1 [Title]) AND Kiyosaki [Author] Cip1 [Title] AND Kiyosaki [Author] 1 1 1
((Cip1 [Title]) AND p21[Title]) AND ("2012"[Date - Publication] : "2013"[Date - Publication]) Cip1 [Title]) AND p21[Title]) AND ("2012"[Date - Publication] : "2013"[Date - Publication] 42 11 41

Я выбрал статьи в свою коллекцию(ссылка на которую ниже) с оптимальным набором параметров: а) самые свежие статьи 2012-2013 годов, б) с описанием каскада белка
Ссылка на мою коллекцию со статьями в PubMed: Коллекция

Белок Cip1. Описание каскада

    Внутриклеточный белок-ингибитор циклин-зависимой киназы(p21/Cip1). Какова же его роль? Играет важнейшую роль в клеточной ответной реакции при повреждении фрагментов ДНК.

    Информацию на которую я базировался, я взял из энциклопедии по молекулярной биологии, издательства Мир.
Белок-ингибитор циклин-зависимой киназы(p21/Cip1) связывает и ингибирует активности комплексов: циклина-CDK2, циклина-CDK1 (самые изученные комплексы, отвечающие за интерфазы), которые в свою очередь отвечают за регуляцию в клеточном цикле 2-ух фаз: предсентетическую(G1) и синтетическую(S). (Пояснение: Всего в жизненном цикле клетки интерфаза подразделяется на 3 стадии:
1)предсинтетическая - наступает сразу же после митотического деления клетки и характеризуется активным ростом клетки и синтезом белка и РНК, благодаря чему клетка достигает нормальных размеров. В течение этого периода синтезируются особые "cтарт" белки (trigger proteins), или активаторы S-периода, к которым относится система Циклин-CDK1. Они обеспечивают достижение клеткой определенного порога (точки R - рестрикции или ограничения), после которого она вступает в S-период-синтетический,
2)синтетическая - характеризуется удвоением содержания (репликацией) ДНК и синтезом белков, в частности, гистонов, которые поступают в ядро из цитоплазмы и обеспечивают нуклеосомную упаковку вновь синтезированной ДНК. В результате происходит удвоение числа хромосом
3)постсинтетическая - следует за S-периодом и продолжается вплоть до митоза)
    Экспресия гена, отвечающая за работу p21 (расположенного на 6-ой хромосоме), жестко контролирует белок, супрессор раковых клеток p53. (Пояснение: При повреждении генома клетки прохождение ею цикла останавливается и включается система репарации ДНК. Тем самым снижается вероятность нежелательной репликации поврежденной ДНК. Многочисленные сигналы, регулирующие деятельность клетки, замыкаются на ген р53, который блокирует прохождение клеточного цикла до устранения возникшего повреждения. Если это повреждение слишком серьезно, р53 (в совокупности с другими регуляторами) запускает программу апоптоза - запрограммированной гибели клетки.

Белок Cip1. Статья

ссылка для просмотра выбранной статьи

   Введение:
P21Cip1/WAF1 играет важную роль в клеточном цикле. РНКаза L — интерферон-индуцируемая нуклеаза, выполняет функцию расщипления РНК. Обнаружено, что РНКаза L регулирует группу медиатора p21, отвечающего за присоединение AU-богатых элементов данной зависимости. Также обнаружена значительная потеря в экспресиии гена p21 в м-РНК, и что за счет этого повышается экспрессия РНК-казы L в Hela-клетках. Период полураспада p21 в м-РНК меняется значительно, в результате воздействия РНКазы L, что явно указывает на посттранскрипционный эффект. В действительности обнаружилось, что большое количество РНКазы L способствует распаду тристетрапролина(TTP/ZFP36) в м-РНК на его окисленную форму. Данный эффект был получен при изучении мутантных форм РНКазы (тех, в которых были точечные мутации). Дефицит тристетрапролина приводит к увеличению экспресии р21. И наоборот, при снижении количества РНКазы, тристетрапролин увеличивается, а экспресии р21 уменьшается. Вывод: можно продемонстрировать новый механизм регуляции фазы G1(предсентетическая фаза интерфазы), благодаря взаимодествию РНКазы с окисленной формой тристетрапролина.

   Материалы и методики:
Использованная клеточная культура: Были использованы HeLa-клетки, так называемые "бессмертные" клетки ракового происхождения, обнаруженные в 50-х годах в тканях матки, а также эмбриональные клетки человеческой почки, предоставленные из American Type Culture Collection (ATCC; Rockville, MD), содержащиеся в специальной среде с добавлением антиобитов. Также использовались клетки карциномы печени Huh-7 также с добавлением антибиотиков.
1)Использование плазмид для клонирования: Использовали дикий тип тристетрапролина(TTP) и мутанта РНКазы C124R, получив вектор pCR3.1. После трансформации, рекомбинантные колонии клеток подвергли ПЦР(полимеразно цепной реакции).
2)Трансфекция
3)ПЦР
4)Иммуноблоттинг и вестернблоттинг
5)Супер-вставка TTP
6)Получение гена, экспрессирующего окисленную форму TTP, то есть получение из дикого типа тристетрапролина(TTP) окисленную форму.
7)Трансфекция м-РНК. Полученный вектор окисленной формы тристетрапролина(TTP) был вставлен в м-РНК культуры клеток Huh7, после чего был оставлен на 48 часов в "качалке", после был проведен иммуноблоттинг повторно.
8)Использовали 1микрограмм РНКазы для трансфекции с ту же культуру клеток Huh7.
9)Подготовка к цитометрическому анализу.
10)Проточная цитометрия, показывающая стадии клеточного цикла.

   Результаты:
Цитометрический анализ показал, что клеточный цикл культуры клеток Huh7 был остановлен в интерфазе, между предсинтетической(G1) и синтетической(S) фазами. Флуоресцентными методами по определению химических соединений было показано большое количество окисленной формы тристетрапролина(TTP). Экспресия р21, стимулируемого РНКазой L была подавлена.

   Некоторые выводы:
Окисленная форма тристетрапролина оказывает катастрофический эффект на нормальную работу РНКазы, которая в свою очередь отвечает за экспресиию гена р21. Это приводит к нарушению клеточного цикла, а именно смена предсинтетической фазы(G1) на синтетическую(S) не осуществлется, что останавливает интерфазу и дальнейшего митотического деления не осуществляется, что приводит в росту клетки без ядерного деления, и в дальнейшем к амитозу.