В качестве объекта исследования была выбрана бактерия Neisseria gonorrhoeae. Были отобраны рестриктазы II типа с известными сайтами рестрикции (Табл. 1). Из таблицы со всеми недопредставленными сайтами рестрикции систем Р-М типа II получен список подходящих сайтов (не короче 4 bp). Они были поданы на вход программе CBcalc. В результате были получены данные о представленности этих сайтов в геноме N. gonorrhoeae. Среди них были отобраны недопредставленные (с O/E < 0.8) и найдены экспериментально предсказанные рестриктазы, специфично режущие по этим сайтам. Поиск рестриктаз осуществлялся python-скриптом, всё остальное сделано в Excel.
Рестриктаза | Сайт рестрикции |
---|---|
Ngo97687ORFPP, M.Ngo97687ORFPP, NgoG7944ORFKP, M.NgoG7944ORFKP | GGCC |
Ngo97687ORFOP, M1.Ngo97687ORFOP, M2.Ngo97687ORFOP, NgoG7944ORFJP, M1.NgoG7944ORFJP, M2.NgoG7944ORFJP | GGTGA |
Ngo97687ORFNP, M.Ngo97687ORFNP, NgoG7944ORFIP, M.NgoG7944ORFIP | RGCGCY |
Ngo97687ORFKP, M.Ngo97687ORFKP, NgoG7944ORFFP, M.NgoG7944ORFFP | GGNNCC |
Ngo97687ORFCP, M.Ngo97687ORFCP, NgoG7944ORFDP, M.NgoG7944ORFDP | GCCGGC |
Ngo97687ORFHP, M1.Ngo97687ORFHP, NgoG7944ORFNP, M.NgoG7944ORFNP | GCSGC |
Ngo97687ORFIP, S.Ngo97687ORFHP, NgoG7944ORFOP, S.NgoG7944ORFOP | GACNNNNNTGA |
Ngo97687ORFDP, M.Ngo97687ORFDP, NgoG7944ORFAP, M.NgoG7944ORFAP | CCGCGG |
В качестве AC был выбран C4Z088, он принадлежит определяющему локализацию септы белку MinC (дословный перевод) грам-положительной бактерии Lachnospira eligens. Ингибирует цитокинез путём дестабилизации филаментов белка FtsZ, формирующих Z-кольцо, на месте которого впоследствии образуется септа между новообразованными клетками.
Число находок выше порога стабилизировалось после второго запуска PSI-BLAST. Это означает, что белки исследуемого семейства обладают высоким сходством друг с другом и малым сходством с другими семействами.