PUBMED

• Главная
• Обо мне
• Семестры
• Проекты
• Заметки

• МГУ
• Kodomo
• ФББ

Данная страница посвящена белку FLIP

История запросов и результатов в PubMed

Ссылка на открытую коллекцию статей по данной тематике:my NCBY collection

Краткое описание статьи Elevation of c-FLIP in castrate-resistant prostate cancer antagonizes therapeutic response to androgen receptor-targeted therapy. McCourt C, Maxwell P, Mazzucchelli R, Montironi R, Scarpelli M, Salto-Tellez M, O'Sullivan JM, Longley DB, Waugh DJ

Введение
Терапия подавления андрогенов(ADT)изначально была эффективна в лечении рака предстательной железы(CaP) и была разработана на основании того,что рост опухоли стимулируется действием андрогенов через их рецепторы(AR).Бикалутамид в настоящее время является одиним из главных анти-андрогенных препаратов, применяемых в терапии рака предстательной железы, прерывая связь андрогенов путем противодействия лиганд-индуцированной активации AR.Возникновение устойчивости к AR- таргетной терапии является основной клинической проблемой, в результате которой возобновляется болезнь.Бикалутамид не обеспечивает эффективный биохимический контроль у всех пациентов,эффективность препарата временная.Знания механизмов, лежащих в основе бикалутамид сопротивления и переход к подавленной устойчивости рака CaP (CRPC) может идентифицировать более эффективное комбинаторное лечение по увеличению доли больных, которые реагируют на этот препарат, и продолжительность реакции будет максимальной.Повышенную экспрессию антиапоптотических белков было предложено представлять как один из механизмов устойчивости действия противоракового препарата, в том числе ADT.Антиапоптотический c-Flip (клеточный Fas-связанный конец области(FADD)-интерлейкин 1-бетта превращающий фермент(FLICE) ингибирующий белок)является эндогенным ингибитором капазы-8 (FLICE), который ингибирует активацию внешнего пути апоптоза опосредовано смерти рецепторов, таких как Fas, DR4 (TRAIL-R1) and DR5 (TRAIL-R2).Сверхэкспрессия с-FLIP была охарактеризована в раковых клетках биопсией тканей предстательной железы и была показана на примере увеличения андроген-независимого роста опухолей голых мышей.Мы также определили, что транскрипция гена, кодирующего с-FLIP регулируется частично AR,хотя активность NF-kB может также усиливать транскрипцию и экспрессию гена в LNCaP и PC3 CaP клеточных линиях.Таким образом, повышенная экспрессия с-FLIP,вызванная как результат неспособности подавить связь андрогенов или кроме того способствующая росту фактор-индуцированной сигнализации,может играть выжную роль при переходе к СRPC.

Целью данного исследования было охарактеризовать экспрессию с-FLIP в тканях предстательной железы и определить, какая экспрессия модулирует чувствительность андроген-зависимых клеток рака в бикалудамиде.В дополнение к прямому нацеливанию на с-FLIP с использованием миРНК, мы также продемонстрировали, что 2 ингибитора гистондеацетилазы (HDACi),droxinostat и SAHA(Vorinostat) могут подавлять с-FLIP экспрессию в андроген-зависимых клетках и что эти агенты могут усиливать апоптоз, вызванный бикулатамидом в нелишенных моделях.Наоборот, мы показываем,что SAHA неэффективна в клеточных моделях лишенных устойчивости к болезням, предполагая, что комбинации HDACI с бикалудамидом применимы во время терапии по спасению, но может быть неэффективной в спасении лишенного устойчивости заболевания. Кроме того, мы покажем как с-FLIP играет важную роль в жизнеспособности лишенных устойчивости раковых клеток предстательной железы.

Методы и материалы

Химикаты и реагенты(все химические вещества были поставлены Sigma. 4-(4-chloro-2-methylphenoxy)-N-hydroxybutanamide (droxinostat) были приобретены в Chembridge(Калифорния, США).

Клеточные культуры(прошедшие проверку LNCaP и 22Rv1 были получены из ATTC(American Type Culture Collection) и культивированы в течение более 4 месяцев)

Проточная цитометрия
Проточная цитометрия проводилась на миРНК или лекарственных клетках, обработанных с использованием ранее описанных протоколов. После лечения обособленные и присоединенные клетки собирали, центрифугировали 2000* г в течение 5 минут, дважды промывали в PBS, содержащем 1 %FCS и фиксированном в 100% этаноле.Гранулы клеток ресуспендировали в 500мкл PI/RNaseA растворе, инкубировали в течение 30 минут при температуре 37градусов и проанализировали на аппарате FACSCalibur. Было получено 10000 результатов.

Трансфекция и люцифераза
Анализы люциферазы для оценки AR и NF-kB транскрипционной активности были проведены, как описано ранее.Трансфицированные клетки инкубировали в течение 24 часов до медикаментозного лечения, SAHA вводили в течение 24 часов перед добавлением бикалуамида(еще на 48 часов).Образцы были проанализированы с использованием Dual-Luciferase Reporter набора анализов в соответствии с инструкцией изготовителя. Транскрипционная активность была рассчитана путем корректировки для эффективности трансфекции используя Renilla и следуя стандартизации показаний образца.

Иммуногистохимия
Экспрессия с-FLIP была проанализирована в образцах предстательной железы, полученных в Pathology Services Политехнического университета Marche в Италии.Клинические характеристики, связанные с этими образцами приведены в таблице .

Результаты

Экспрессия c-FLIP увеличилась в высококачественную простатическую интраэпителиальную неоплазию(HGPIN) и СaP ткани относительно нормальному эпителию.

Максимальная экспрессия с-FLIP была обнаружена в клетках,лишенных устойчивости к раку предстательной железы(СRPC)

In vitro ,блокирование с-FLIP вызывает спонтанный апоптоз и увеличивает 22Rv1 и LNCaP клеточную чувствительность к бикалутамиду, определенную с помощью проточной цитометрии, PARP расщипления и анализа активности каспазы.

Ингибиторы гистондеацетилазы,droxinostat и SAHA также подавляются c-FLIP экспрессией,индуцированной капазой-8 и капазой-3/7

Повышенная экспрессия с-FLIP была обнаружена в СRPC клеточной линии VCaP и упрочила свою нечувствительность к бикалутамиду и SAHA в пробирке.

Заключение
c-FLIP снижает эффективность AR-таргетной терапии и поддерживает жизнеспособность клеток рака предстательной железы.Комбинация HDACi с терапией лишения андрогенов(ADT) может быть эффективной на ранней стадии заболевания, используя с-FLIP экспрессию как индивидуальный биомаркер чувствительности.Прямое нацеливание на с-FLIP, однако, может быть соответствующим для повышения реакции существующих и новых лекарств в СRPC.

---

© Boskhomdzhieva Baina, 2012

Последнее обновление 06.03.2012