Чтение последовательностей по Сэнгеру


Задание №1

Оригинальная хромотограмма прямой последовательности, обратной.

Обратное прочтение было подвергнуто Reverse+Complement, что позволило использовать его для корректировки прямого прочтения.

Также были отрезаны нечитабельные участки хромотограммы на 3' и 5' концах прямого прочтения (большой уровень шума, неправильная форма пиков, неравномерный сигнал).

В таблице 1 представлены основные характеристики хромотограммы:

Характеристика Значение для прямого прочтения Значение для обратного прочтения (после reverse+complement)
Длина начального нечитаемого участка 56 (7,8 % хромотограммы) 11 (1,5% всей хромотограммы)
Длина конечного нечитаемого участка 38 (5,3 % хромотограммы) 51 (7,0% всей хромотограммы)
Оценка соотношения сигнала и шума >/td> 10-25% 10-25%
Неравномерность силы сигнала и шума вдоль последовательности есть области с неравномерной величиной сигнала, области с более высоким шумом есть области с неравномерной величиной сигнала, области с более высоким шумом

Примеры исправлений в обрезанной хроматограмме:

На позиции 81 N было заменено на G, основываясь на данных обратного чтения. Сложно уверенно заявить, что там находится имеено остаток гуанина, так как у аппарата в обратном прочтении также возникли затруднения на этом месте.

На позици 116 N был заменён на G, основываясь на данных обрaтного чтения.

На позициях 425 и 452 можно было бы предположить полиморфизм, но общий уровень шума и обратное прочтение подсказывают однозначные замены N на G и A.

Исправленная последовательность

Исправленная прямая последовательность.

Проект выравнивания исправленной прямой и перевёрнутой обратной цепочек .

Выравнивание представлено на изображении 1:

Пример нечитаемого фрагмента хроматограммы

Перекрывающиеся пики, их неправильная форма, неравномерность интенсивности сигнала - слишком много шума для того, чтобы можно было прочитать эту последовательность.



© Сурикова Елена 2016