Чтение последовательностей по Сэнгеру

Задание 1


Ссылки на исходный файлы в .ab1 формате
WSLOX1_COI_F_B01_WSBS-Seq-1-08-15.ab1(прямая)
WSLOX1_COI_R_B02_WSBS-Seq-1-08-15.ab1(обратная)
Ссылки на последовательности в fasta формате
WSLOX1_COI_F_B01_WSBS-Seq-1-08-15.fasta(прямая)
WSLOX1_COI_R_B02_WSBS-Seq-1-08-15.fasta(обратная)
Ссылка на проект Jalview
Скачать проект
Координаты нечитаемых участков для прямой и для обратной последовательности были определены по координатам
прямой последовательности.Для этого в окне с обратной последовательностью была включена опция "Reverse".
Границы нечитаемых 5' и 3' участков5'3'
Прямая последовательность1-55636-716
Обратная последовательность 538-7181-56
На протяжении как прямого, так и обратного прочтения отношение сигнала к шуму примерно 4 к 1. Присутствует довольно значительный разброс
высоты пиков. Однако, стоит отметить, что качество прочтения прямой последовательности значительно хуже, чем обратной.При редактировании
прямого прочтения пришлось внести гораздо больше изменений, чем при редактировании обратного прочтения

Проблемные нуклеотиды в последовательности:


9-ый нуклеотид в обратном прочтении


В обратном прочтении произошло наложение пиков, однако после сравнения с прямым прочтением
можно сделать однозначный вывод и заменить N на t
Graph

120-ый нуклетид в прямом прочтении


В прямом прочтении наложилось сразу несколько пиков и программа не смогла определить нуклеотид,
однако, обратившись к обратному прочтению, устанавливаем, что 120-ый нуклеотид это G
Graph

141-ый нуклеотид в прямом прочтении


На месте 141-го нуклеотида пик G значитильно выше всех остальных, тем не менее программа
не смогла распознать его. Для того, чтобы убедиться в своей правоте сверимся с обратным
прочтением: действительно 141-ый нуклеотид это G.
Graph

151-ый нуклеотид в обратном прочтении


В обратном прочтении сигнал на месте 151-го нуклеотида лишь незначительно выше шума,
поэтому сверяемся с прямым прочтением и меняем N на C.
Graph

195-ый нуклеотид в обратном прочтении


В обратном прочтении уровень сигнала значительно выше, поэтому можно определить, что
195-ый нуклеотид в прямом прочтении это A.
Graph

Задание 2.Пример плохой хроматограммы


Graph
Здесь приведен нечитаемый участок прямой последовательности из задания 1.
Пики широкие и накладывающиеся друг на друга, сигнал находится на одном уровне с шумом и неотличим от него.

© Simon Konnov 2017