\ Суздаленко, практикум по Uniprot

Uniprot

Практикумы 8,10

Факультет Биоинженерии и Биоинформатики

Автор: Суздаленко Анна

Введение

Резольваза структуры Холлидея Hjc- эндонуклеаза, разрешающая при гомологичной рекомбинации структуры Холлидея, делая двуцепочечные разрывы, и, в результате, создавая "липкие" концы ДНК для дальнейшего лигирования. Хотя у прокариот нет кроссинговера с половым процессом, гомологичная рекомбинация часто происходит при репарации ДНК. Hjc ингибирует работу хеликазы Hjm[1].

Интересно, что резольвазы структур Холлидея могут встречаться и у бактериофагов. Помимо увеличения разнообразия в своей ДНК перед упаковкой в капсид, структуры Холлидея нужны некоторым вирусам для создания нарушений в кодирующих последовательностях хозяина[2].

Белок был получен из археи Sulfurisphaera tokodaii из типа Crenarchaeota. Её порядок Sulfolobales был описан самым первым в классе Thermoprotei (Stetter 1989). Хоть архея и термоацидофил с оптимальной температурой роста 80С, GC состав у неё всего лишь 32,8%. Sulfurisphaera tokodaii уникальна в том, что на 3 конце большинства тРНК у неё нет CCA участка, который свойственнен прокариотам.[3]

Таблица 1.Техническая информация
RecName:Holliday junction resolvase Hjc
Uniprot IDHJC_SULTO
Uniprot ACF9VND5
EMBLBA000023
PDB2EO0
Длина144 аминокислот
Молекулярная масса16336 Да
Описанная часть последовательности"A/B=2-144"из чего следует, что описан полностью, не считая самого начала (первые 3 аминокислоты в Uniprot и PDB не совпадают[4]).

Сеансы поиска в Uniprot

Таблица 2
Запрос в UniprotКоличество организмов в выдаче
annotation:(type:function "holliday junction") taxonomy:archaea715
annotation:(type:function "holliday junction") taxonomy:bacteria NOT taxonomy:archaea132276
annotation:(type:function ribosome) taxonomy:archaea31041
annotation:(type:function ribosome) taxonomy:bacteria NOT taxonomy:archaea1045896

Если принять, что количество белков с функциями, связанными с рибосомами, пропорционально числу отсеквенированных организмов со своими белками, то по невыясненным причинам структуры Холлидея встечаются относительно в 5,5 раз чаще у архей, нежели у бактерий.

Анализ кластеров

Таблица 3
КластерID
UniRef100UniRef100_F9VND5
UniRef90UniRef90_F9VND5
UniRef50UniRef50_Q7LXU0

Изучаемый белок не имеет в Uniref-100 идентичных фрагментов или копий.

В кластере 90% он является representative, seed же гипотетическая резольваза структур Холлидея из той же бактерии (отличается от нашего лишь со 2ой по 5ой вставленными аминокислотами, из чего следует, что это может быть лишь артефактный сиквенс того же белка). Также в этом кластере есть резольваза структур Холлидея из архебактерии того же рода - Sulfurisphaera ohwakuensis, и hjc из Sulfolobus sp., археи из того же семейства и из того же местообитания - кислых горячих источников.

В кластере 50% имеется 53 белка, и исследуемая резольваза не seed и не representative. Большинство находок в этом кластере принадлежит также археям из порядка Sulfolobales.

Сравнение протеомов

Для сравнения протеомов в качестве референсного взяли протеом Cenarchaeum symbiosum - хорошо изученной археи из группы Thaumarchaeota, которая является сестринской по отношению к Crenarchaeota[5]. Thaumarchaeota - тип архей, состоящий в основном из окислителей аммония[6], в то время как многие хорошо описанные Crenarchaeota являются серными термоацидофилами, кем и является Sulfurisphaera tokodaii.

Таблица 4
Количества..Sulfurisphaera tokodaiiCenarchaeum symbiosum
(Proteome ID)UP000001015UP000000758
Общее белков28052022
Белков в Swissprot377102
Трансмембранных белков550262
Ферментов642455
Белков с серой в качестве кофактора4121
Таблица 5
Запросы
Общее белковorganism:"Sulfurisphaera tokodaii (strain DSM 16993 / JCM 10545 / NBRC 100140 / 7) (Sulfolobus tokodaii) [273063]" AND proteome:up000001015
Белков в Swissprotreviewed:yes AND organism:"Sulfurisphaera tokodaii (strain DSM 16993 / JCM 10545 / NBRC 100140 / 7) (Sulfolobus tokodaii) [273063]" AND proteome:up000001015
Трансмембранных белковannotation:(type:transmem) AND organism:"Sulfurisphaera tokodaii (strain DSM 16993 / JCM 10545 / NBRC 100140 / 7) (Sulfolobus tokodaii) [273063]" AND proteome:up000001015
Ферментовec:* AND organism:"Sulfurisphaera tokodaii (strain DSM 16993 / JCM 10545 / NBRC 100140 / 7) (Sulfolobus tokodaii) [273063]" AND proteome:up000001015
Белков с серой в качестве кофактораcofactor:(chebi:sulfur) AND organism:"Sulfurisphaera tokodaii (strain DSM 16993 / JCM 10545 / NBRC 100140 / 7) (Sulfolobus tokodaii) [273063]" AND proteome:up000001015

Данные подтверждают гипотезу о том, что организмы, живущие в богатых серой местообитаниях, будут чаще использовать серу и в кофакторах по сравнению с родствениками из другой экологической группы.

Список источников:

1. https://www.uniprot.org/uniprot/F9VND5

2. Haley D.M. Wyatt and Stephen C. West, Holliday Junction Resolvases. Cold Spring Harb Perspect Biol. 2014 Sep; 6(9): a023192.

3. Y. Kawarabayasi et al., Complete Genome Sequence of an Aerobic Thermoacidophilic Crenarchaeon, Sulfolobus tokodaii strain7. DNA Research, 2001; Volume 8, Issue 4: 123140.

4. https://www.rcsb.org/structure/2EO0

5. Cox et al., The archaebacterial origin of eukaryotes. Proc Natl Acad Sci USA, 2008; 105 (51): 20356-61.

6. Spang A et al., Distinct gene set in two different lineages of ammonia-oxidizing archaea supports the phylum Thaumarchaeota. Trends Microbiol, 2010; 18 (8): 331340.