Практикум 6.

Задание 1.

Для анализа предложенных хроматограмм: прямая последовательность, обратная последовательность использовалась программа ChromasPro (пробная версия).

Скачать консенсусную последовательность.

Скачать выравнивание.

Анализ хроматограмм

Важное замечание: на всех изображениях прямая последовательность внизу, обратная - наверху.

pr6_ambig1
Рисунок 1.
Простой случай - при взгляде на хроматограмму сразу становится понятен нужный нуклеотид (T).
мambig2
Рисунок 2.
Случай поинтереснее, тоже простой - есть мешающий дополнительный пик, но довольно точно определить нужный нуклеотид (A) можно (но не нужно) даже без второй хроматограммы.
pr6_ambig3
Рисунок 3.
В этом случае без второй хроматограммы никак не обойтись - пики равной высоты наложились друг на друга. Нужно понять, полиморфизм это или ошибка в одной из хроматограмм. Судя по второй, всё же ошибка, можно однозначно ставить нуклеотид (C).
pr6_ambig4
Рисунок 4.
Здесь ситуация ещё сложнее, чем предыдущая. Второй хроматограммы в этом месте нет, существует ли вообще на позиции нуклеотид и если да, то какой из двух, непонятно. По расстоянию с соседями похоже, что нуклеотид всё же есть, поставила код пурина (R).
pr6_ambig5
Рисунок 5.
Здесь программа большей частью сама разобралась. Похоже, что это пятна краски, так как пики под ними нормальные, нуклеотид (G) опознать легко.
Характеристики анализируемых хроматограмм

Нечитаемый участок 44_F.ab1 (прямая) в начале: 1-23

Нечитаемый участок 44_F.ab1 (прямая) в конце: 675-719

Нечитаемый участок 44_R.ab1 (обратная) в начале: 1-31

Нечитаемый участок 44_R.ab1 (обратная) в конце: 714-718

Программа выделила те же нечитаемые участки, дополнительных настроек не производилось.

Качество сигнала в среднем по последовательности около 50% для отдельных файлов, в сборке около 85%.

Качество хроматограмм ниже в начале и конце (рис. 6), а также местах с аномалиями (рис. 7). Качество консенсусной последовательности ниже, когда недоступна одна из хроматограмм или их результаты не сходятся между собой - в основном это также концевые участки.

Задание 2.

pr6_bad
Рисунок 6.
На этой хроматограмме (WSWS2931_H3_R_E10_2013-06-11-22-39-58.ab1) видно два типа пиков, что, скорее всего, вызвано попаданием двух разных ДНК в образец. Несмотря на то, что программа выстраивает последовательность, понятно, что определить, какие нуклеотиды относятся к какой ДНК и каковы их точные последовательности, практически невозможно.