Назад

  1. Исследование доменной структуры конкретного белка
    1. Описание доменной структуры белка по данным Pfam
    2. БД Pfam.

      Доменная структура белка ASPA_Ecoli по данным Pfam

      Cхема из Pfam:
      Пояснения к схеме
      Pfam AC Pfam ID Полное название семейства домена
      Положение в последовательности белка ASPA_Ecoli Клан
      1. PF00206 Lyase_1 Лиаза_1, фермент, принадлежащий классу лиаз, для которых субстратом является фумарат. Было показано, что в этих ферментах есть короткий консервативный участок последовательности рядом с метионином, который, возможно, участвует в каталитической активности такого типа ферментов. 13-345 -
      2. PF10415 FumaraseC_C Фумарат-гидратаза С катализирует стерео-специфичные взаимные превращения фумарата в L-малат в цикле Кребса. Целый белок формирует тетрамер заметно глобулярной формы. Фумарат-гидратаза С_С состоит из 65 С-концевых аминокислотных остатков , рассматриваемых как домен 3. Ядро молекулы состоит из пучка из 20 альфа-спиралей из пучка из 5 спиралей домена 2. Считают, что этот домен не является частью активного центра или активационного сайта, при этом домен, спиральный по структуре, формирует небольшой пучок 411-465 -

    3. Экспортирован файл в формате msf выравнивание-затравка (seed) для N-концевого домена заданного белка.

      PF00206_seed.msf

    4. Сравнение описания доменной структуры в Pfam с описанием в других БД
    5. В БД InterPro найдено описание всех подписей, интегрированных в InterPro:

      На мой взгляд, наиболее отличается от подписей Pfam подпись PROSITE pattern, на рисунке - последняя из интегрированных подписей(желтый цвет).

      Его InterPro ID IPR020557
      Эта подпись характеризует консервативный участок фермента фумаратлиаза длиной 10 аминокислотных остатков.
      Паттерн G-S-x(2)-M-x-{RS}-K-x-N
      Такой участок представлен во всех интегрированных подписях из других БД(всего указано 10) и несет мало информации о первичной структуре заданного белка.

    6. Сопоставление доменной структуры с 3D структурой заданного белка
    7. Изображение белка:


      PDB ID 1JSW
      Белок состоит из 4 цепей, на каждой из которых выделены 2 домена, рассмотренные выше.
      Зеленым выделены Lyase_1 на всех цепях, желтым - FumaraseC_C, синим - то, что не входит в эти домены.

      Рассмотрим отдельно цепь В:


      Можно утверждать, что домен FumaraseC_C соответствует структурному домену.
      Домен Lyase_1 не полностью совпадает со струтурным доменом, есть участок белка в виде альфа-спирали, который входит в структурный домен, но не является частью домена Lyase_1(выделен синим).

      В целом, можно даже сказать, что оба домена составляют один структурный домен, но не полностью с ним совпадают - не содержат "синего" участка последовательности.

  2. Исследование эволюции отдельных доменов
    1. Описание: как часто и в каких организмах встречаются домены белка ASPA_Ecoli
    2. Выбрали один домен заданного белка: Lyase_1(PF00206).

      Представленность домена PF00206 в организмах разных видов

      Таксон
      Количество белков с доменом PF00206
      Эукариоты Зеленые растения 90
      Грибы 211
      Животные 189
      Остальные эукариоты 110
      Бактерии 5220
      Археи 168

      Для заполнения таблицы были выбраны данные, содержащие число уникальных последовательностей, на которых был найден изучаемый домен.

      Полученные данные показывают, что существенно большее распространение этот домен получил среди бактерий.

    3. Определить, в скольких разных белках Escherichia coli K12 встречаются домены, представленные в заданном белке
    4. Представленность изучаемых доменов в белках Escherichia coli (strain K12)

      PFAM ID Количество белков в Escherichia coli (strain K12)
      1. PF00206 4
      2 PF10415 2

      Все найденные белки принадлежат классу лиазы, отличаются С-терминальным доменом, кроме белка PUR8_ECOLI, первый домен в нем не идентичен PF00206.

      С точно такой же доменной организацией найден единственный белок в Escherichia coli (strain K12), но также найден белок FUMC_ECOLI, доменная организация которого отличается неполной идентичностью домена PF10415:

      Таким образом, домен PF00206 не является характерным для единственного белка, домен PF10415 встречается в одном белке.

    5. Разные доменные перестройки

    6. Домен PF00206

      а) сочетание с другими доменами, причем бывает как на N-, так и на C-конце последовательности.

      ASPA_ECOLI: C0S5W7_PARBP:

      б) дупликация + перекрытие

      ASPA_ECOLI: Q0DS22_ORYSJ:

      в) разрыв в последовательности домена

      ASPA_ECOLI: Q4UB18_THEAN :

      Домен PF10415

      а) может не сочетаться с другими доменами

      ASPA_ECOLI: C2Y934_BACCE :

      б) может сочетаться с другими доменами, притом перекрываясь с ними

      ASPA_ECOLI: A5P9M3_9SPHN :



      © Ксения Лежнина 2008-2010