Информация о белке RhoA

Информацию о белке RhoA можно найти, используя поисковую систему PubMed. Ниже представлена таблица с историей запросов PubMed и их результатов.

Запрос Запрос как его понял PubMed из Search details Всего находок всего в открытом доступе Всего обзоров
RhoA [TIAB] RhoA[TIAB] 5626 3248 315
RhoA[ti] RhoA[ti] 1703 991 37
RhoA[ti] AND GTP[ti] RhoA[ti] AND GTP[ti] 46 26 0
RhoA[ti] AND apoptosis[ti] RhoA[ti] AND apoptosis[ti] 23 10 0
RhoA[ti] AND Oncogene Protein RhoA[ti] AND ("oncogene proteins"[MeSH Terms] OR ("oncogene"[All Fields] AND "proteins"[All Fields]) OR "oncogene proteins"[All Fields] OR ("oncogene"[All Fields] AND "protein"[All Fields]) OR "oncogene protein"[All Fields]) 182 113 0
PhoA[ti] AND "2000"[DP] : "2013"[DP] PhoA[ti] AND "2000"[PDAT] : "2013"[PDAT] 18 9 0
RhoA/Rho kinase up-regulate Bax to activate a mitochondrial death pathway and induce cardiomyocyte apoptosis. Related citation: A possible role of RhoA/Rho-kinase in experimental spinal cord injury in rat.

Ссылка на мою коллекцию публикаций

Описание экспериментальной статьи "RhoA/ROCK1 signaling regulates stress granules formation and apoptosis".

Ссылка на статью

Сигнализация белков RhoA/ROCK1 регулирует формирование стрессовых гранул и апоптоз

Введение

Стрессовые гранулы – это субклеточные структуры, образующиеся в клетках в ответ на различные стрессы, такие как высокая температура, отравление тяжелыми металлами или недостатком питательных веществ. Было высказано предположение, что функция стрессовых гранул заключается в защите вспомогательных мРНК и подавлении их трансляции с помощью ассоциированных с ними белков. В последнее время исследования показали, что стрессовые гранулы способны защитить клетки от апоптоза.

RhoA является наиболее изученной ГТФазой (семейство гидролаз, которые связывают и гидролизуют гуанозинтрифосфат), регулирующей клеточный цикл и формирование цитоскелета.

В данном исследовании было обнаружено, что после стресса RhoA и ROCK1 становятся активными и их деятельность направлена на эффективное формирование стрессовых гранул. Далее оба белка изолируются в этих гранулах. Принудительное отключение образования стрессовых гранул приводит к разобщению RhoA , ROCK1 и других компонентов гранул. Впоследствии освобожденный белок ROCK1 вызывает апоптоз. Этот апоптотический путь заблокирован в клетках, содержащих стрессовые гранулы.

Материалы и методы

  1. Антитела, реагенты и плазмидные конструкции.

    2. Разработкой антител занимались компании Santa Cruz Biotechnology (anti-Actin, anti-ROCK1, anti-ROCK2, anti-Cdc42, anti-Rac1, anti-RhoA, anti-JIP-3, anti-Dcp1a, anti-PABP, anti-HuR и anti-TIA-1), Upstate (anti-GST и anti-Phospho-Serine), Chemicon (anti-FMRP) и Cell Signaling (anti-JNK, anti-phspho-JNK). Окрашивание проводилось с помощью люминесцентной краски DAPI и AMP-PNP.

  2. Блоттинг, иммунопреципитация и иммуногистохимия.

  3. Создание стрессовой ситуации с помощью тепловой шоковой терапии и обработкой арсенитами. Анализ сопротивления протеаз и метаболическая маркировка.

    4. Тепловая шоковая терапия проводилась при температуре 43°С в течение 30-и минут. Воздействие арсената натрия продолжалось в течение 30-и минут. Испытание сопротивления протеаз RhoA и ROCK1 было выполнено с помощью лизат.

  4. Малые интерферирующие РНК и трансфекция.

    5. Малые интерферирующие РНК, используемые в этом исследовании, были разработаны компанией Qiagen. Трансфекция малых интерферирующих РНК была выполнена при помощи реактива трансфекции Hiperfect.

  5. Анализ деятельности RhoA и ROCK1.

    6. Для анализа активации RhoA использовался GST-Rhotekin, из-за которого активный белок выходит из-под контроля.

  6. Анализ апоптоза.

    7. Для анализа апоптоза использовался аннексин А5, который добавляли к шок-обработанным клеткам, распределенным в буфере. Их держат в течение 10 минут при комнатной температуре и контролируют с помощью флуоресцентного микроскопа.

Результаты

  1. RhoA и ROCK1 присутствуют в стрессовых гранулах.

    2. Было обнаружено, что RhoA расположен в отдельных очагах, перекрывающихся с некоторыми компонентами стрессовых гранул, известных как белки, отвечающие за умственную отсталость.

  2. RhoA и ROCK1 важны для формирования стрессовых гранул.

    3. Для того, чтобы определить требовались ли эти протеазы для формирования стрессовых гранул, были введены малые интерферирующие РНК, понижающие экспрессию специфических генов. Это привело к тому, что RhoA и ROCK1 сформировали значительно меньшее количество стрессовых гранул.

  3. Действие RhoA и ROCK1 необходимы для формирования стрессовых гранул.

    4. Вышеупомянутые данные показали, что эти белки были физически связаны со стрессовыми гранулами. Далее было установлено, что при удалении какого-нибудь из двух белков, процесс формирования стрессовых гранул прекращался. Это значит, что действия RhoA и ROCK1 необходимы для эффективного формирования стрессовых гранул.

  4. Стрессовые гранулы блокируют апоптоз путем изолирования активированного ROCK1.