Главная страница
term3 🕒

Прочтение последовательностей по Сэнгеру

TASK1. Oтчёт о проблемах при чтении хроматограмм

1.Ссылка на файл с результатом — последовательностью в fasta формате
2.JalView-проект с выравниванием прямого и обратного прочтений
3.Ссылки на исходные файлы в .ab1 формате для прямой & обратной цепей

Границы нечитаемых 5'- и 3'-участков в каждой последовательности
Границы нечитаемых 5'- и 3'-участков 5'-участок 3'-участок
Прямая последовательность 1-29 355-384
Обратная последовательность 1-4 356-382
Неравномерность силы сигнала и шума вдоль последовательности присутствует на протяжении всей хроматограммы.
Отношения сигнала и шума в среднем большие,то есть хроматограмма читаема.
Далее идет сравнение участков обратной (картинка сверху) и прямой(картинка снизу) хроматограмм.

1. В данном случае представлен пример полиморфизма Y , потому как скачки сигналов нуклеотидов C & T имеют одинаковую высоту.

2. 287-ой нуклеотид А проблемный, потому что разность высоты сигнала и шума мала (меньше половины высоты сигнала). В данном случае должен стоять нуклеотид А

3. Здесь представлен полиморфизм R нуклеотидов А и G. Должен стоять н-д G

4. 80-ой нуклеотид А проблемный, потому что разность высоты сигнала и шума мала (меньше половины высоты сигнала) Должен стоять н-д A

TASK2. Пример нечитаемого фрагмента хроматограммы

Совсем плохая хроматограмма
По картинке можно сказать,что хроматограмма бесполезна. В Chromas качество хроматограммы изображается уровнем 
окраски в квадратике, расположенным вверху над буквой нуклеотида. В данном случае только 8 из 81 квадратиков имеют окраску.
Здесь определены всего лишь 3 нуклеотида (29-й,44-й и 65-й нуклеотиды по счету), остальные нуклеотиды вырожденные.
Однако определение 65-й нуклеотида тоже было неправильным, в этом можно убедиться,если посмотреть на почти незаметный 
скачок сигнала нуклеотида А. Нельзя не заметить полного отсутствия скачков (41-66 нуклеотиды) и появление последователных, налегающих
друг на друга резких скачков синего,красного и зеленого сигналов. Такое поведение сигналов сильно отличается от такового в 
идеальной хромтаграмме. Ниже, в качестве сравнения, приведен пример идеальной хроматограммы. 

Идеальная хроматограмма

© Цыганов Кирилл, 2017