Работа в поисковой системе Pubmed

Поисковые запросы

Запрос Запрос как его понял PubMed из Search details Всего находок Всего в открытом доступе Всего обзоров
ERK ERK[All Fields] 5300 2307 127
extracellular signal-regulated kinase [ti] extracellular signal-regulated kinase [ti] 2044 1210 24
(Extracellular signal-regulated kinase[Title]) AND pathway[Title/Abstract] Extracellular signal-regulated kinase[Title] AND pathway[Title/Abstract] 1038 622 16
Related Citations for PubMed (Select 16880823) "MAPK signalling: ERK5 versus ERK1/2" related citations 234 98 53
Related Citations for PubMed (Select 15902482) "Control of MAP kinase signaling to the nucleus" related citations 118 60 22
Related Citations for PubMed (Select 16170216) "The ERK cascade: a prototype of MAPK signaling" related citations 130 48 39
Related Articles by Review for PubMed (Select 16170216) "The ERK cascade: a prototype of MAPK signaling" related reviews 39 10 39

Результаты последнего запроса выглядят наиболее подходящими. Просмотреть коллекцию статей можно здесь.

Hydrogen Peroxide-Induced Extracellular Signal-Regulated Kinase Activation in Cultured Feline Ileal Smooth Muscle Cells

Авторы статьи: Hyun Ju Song, Tai Sang Lee, Ji Hoon Jeong, Young Sil Min, Chang Yell Shin и Uy Dong Sohn
PubMed ID: 15328380
[Ссылка на полный текст]

Авторы статьи хотели узнать, как влияет пероксид водорода на запуск сигнальных митогенных каскадов в клетке.

Описание эксперимента

Получили культуры клеток гладкой мускулатуры из подвздошной кишки кошки. Инкубировали их в DMEM (Dulbecco’s modifed Eagle's medium, раствор, содержащий аминокислоты, глюкозу, витамины и неорганические соли, необходимые для клеточной культуры) с 0,1% FBS (эмбриональная сыворотка коровы) в течение 48 часов, чтобы остановить клеточный рост и активность на уровне генов. Затем воздействовали на культуры раствором пероксида водорода в различных концентрациях и через различные временные промежутки, в присутствии или отсутствии различных ингибиторов. Затем клетки лизировали, замерили содержание белка в лизате. Белки разделили электрофорезом. Затем провели вестерн-блот с антителами, специфичными к ERK(1/2), p38 MAPK и SAPK/JNK и к фосфорилированным формам тех же белков. Измерив оптическую плотность мембран, рассчитали соотношение концентраций фосфорилированных MAPK ко всем MAPK.

Такие же клеточные культуры с остановленным ростом обработали 1 мМ раствором H2O2 в течение разных временных промежутков. Клетки промыли, обработали трипановым синим (вещество, окрашивающее мёртвые клетки и ткани). Окрашенные клетки подсчитали, используя фазово-контрастный микроскоп, гемоцитометр и счётчик.

Результаты

  1. Чем выше концентрация H2O2 (в пределах от 10-6 до 10-3 М), тем больше активированной (фосфорилированной) формы ERK.
  2. После обработки клеток H2O2 количество фосфорилированного ERK в первые 30 минут резко возрастает, затем медленно снижается.
  3. Те же закономерности проявляются для белка JNK, для киназы p38 - нет.
  4. Обработка клеток 1 мМ H2O2 в течение 120 минут не увеличила количество мёртвых клеток.
  5. При обработке клеток до добавления пероксида ингибитором белка MEK (один из участников ERK-каскада), концентрация активированной формы ERK возрастает в меньшей степени. Следовательно, MEK участвует в пути активации ERK, запущенном пероксидом водорода.
  6. Обработка клеток ингибитором PKC (Protein Kinase C) не влияет на концентрацию активированной формы ERK после обработки пероксидом водорода. Следовательно, PKC не участвует в пути активации ERK, запущенном H2O2.
  7. Если инкубировать культуру в буфере, не содержащем ионы Ca2+, обработка пероксидом водорода не влечёт за собой увеличение концентрации активированной формы ERK. Добавление ингибитора кальмодулина (кальций-связывающего белка) снижает рост концентрации фосфорилированного ERK. Следовательно, кальций играет роль в запуске пути активации ERK пероксидом водорода.
  8. Если обработать клетки тирфостином или сурамином, к котороым специфичен рецептор тирозин киназ (рецептор, специфичный так же к факторам роста), увеличение концентрации активированной формы ERK снижается. Для сурамина - прямопропорционально концентрации.
  9. Добавление антиоксидантов (маннитола, специфичного к гидроксильным радикалам, или предшественника глутатиона) снижает увеличение концентрации фосфорилированного ERK под действием пероксида водорода. Добавление o-фенантролина, связывающего ионы железа, имеет тот же эффект.
  10. Предварительная обработка FTS (S-farnesylthiosalicylic acid), ингибирующей белок Ras, участвующий в ERK-каскаде снижает рост концентрации фосфорилированного ERK. Следовательно, этот путь является Ras-зависимым.

Вывод

Коротковременное воздействие пероксида водорода на клетки может запускать митогенные процессы, что, вероятно, служит защитным ответом на окислительный стресс. Возможно, H2O2 через металл-катализируемые реакции переходит в форму гидроксильного радикала, который в дальнейшем запускает ERK-каскад.