PubMed

О Raf-1 в статье "Angiogenic Sprouting Requires the Fine Tuning of Endothelial Cell Cohesion by the Raf-1/Rok-α Complex"

В статье описана роль Raf-1 в ангиогенезе.

Для изучения роли Raf-1 в ангиогенезе были получены мутантные мыши, у которых был удалён ген, кодирующий Raf-1. Отсутствие Raf-1 у мышей было подтверждено с помощью ПЦР (полимеразной цепной реакции), проведённой для ДНК, выделенной из клеток первичных микрососудов лёгких, с использованием праймеров к гену, кодирующему Raf-1. У мутантных мышей на шестые сутки после рождения была зафиксирована задержка развития сосудистой оболочки глаз. И, хотя в 2D-культуре мутантных клеток митотический и апоптотический индексы, а также способность клеток к миграции были не ниже, чем в культуре клеток дикого типа, культура мутантных клеток, нанесённая на микробусины и погружённая в фибриновый гель (3D-культура), оказалась практически неспособной к "прорастанию" - делению, линейной миграции и формированию сосудов, - а формировала подобие мезенхимы вокруг микробусин и имела повышенный апоптотический индекс. Аналогичная 3D-культура клеток дикого типа за трое суток образовала сосудистую сеть (см. рисунок 2).

Известно, что для нормального формирования сосудов необходимо наличие VEC (VE-cadherin) в области межклеточных контактов, что и наблюдалось в 3D-культуре клеток дикого типа. В 3D-культуре мутантных клеток VEC был распределён диффузно (см. рисунок 3). Сходство 2D-культур клеток дикого типа и мутантных клеток можно объяснить одинаковым распределением в них VEC.

Известно, что VEC, содержащийся в области межклеточных контактов в нормально формирующихся сосудах, соединяется с актомиозиновой системой клетки посредством активного миозина II. В культуре клеток дикого типа была фосфорилирована MLC2 (myosin light chain 2). В культуре мутантных клеток количество фосфорилированной MLC2 в области межклеточных контактов было значительно меньше, чем в культуре клеток дикого типа, хотя в остальных частях мутантных клеток количество фосфорилированной MLC2 было таким же, как в клетках дикого типа. Известно, что степень фосфорилирования MLC2 в области межклеточных контактов обусловлена активностью Rok-α.

При выделении VEC из культур клеток дикого типа и мутантных клеток методом иммунопреципитации было обнаружено, что в клетках дикого типа VEC образует комплекс с Rok-α и с Raf-1, а в мутантных клетках VEC не образует комплекс даже с Rok-α, из чего можно сделать вывод, что Raf-1 необходим для образования комплекса VEC с Rok-α, который обеспечивает локализацию VEC в области межклеточных контактов, что необходимо для связывания VEC с фосфорилированной MLC2 и нормального формирования сосудов.

Литература: